DNA凝膠回收試劑盒
產品組分
貨號 | N1071 （50次） | N1072 （100次） | N1073 （200次） |
溶液BD | 20 ml | 40 ml | 80 ml |
溶液PE | 15 ml | 15 ml×2 | 20 ml×3 |
溶液Eluent | 2.5 ml | 5 ml | 10 ml |
DNA純化柱 | 50個 | 100個 | 200個 |
說明書 | 1份 | 1份 | 1份 |
● 溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。
● 溶液BD中含有變性劑，請不要直接接觸皮膚。
● 上述產品組分均可單獨購買，詳見產品索引。
產品說明
本產品采用了經典的硅膠膜技術，用于從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段（50 bp-10 kb），也適合從PCR產物、酶促反應液中回收DNA，也可用于基因組DNA等樣品的純化。其純化原理是含有目的片段的瓊脂糖凝膠溶解后，硅膠膜柱高效可逆地吸附體系中的DNA片段（高鹽、低pH值），蛋白及其它雜質不被吸附而被除去，被吸附的DNA片段在低鹽、高pH值條件下再被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段，此DNA片段可直接用于各種酶促反應等。
質量控制
從1 % TAE瓊脂糖凝膠中純化50 bp、1,000 bp、10,000 bp的DNA片段。
保存條件
室溫保存2年。
注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
● 溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇，即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇，20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇，使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產品對電泳使用的瓊脂糖種類沒有嚴格限制。為了保證回收DNA的質量和回收效率，盡量使用高純度的瓊脂糖。
● 電泳時請使用新鮮配制的TAE電泳緩沖液，以免影響電泳及回收效果。TBE電泳緩沖液中的硼酸與瓊脂糖相互作用生成的復合物會影響DNA的回收效率，因此TBE凝膠電泳不適合用于DNA回收。
● 請適當延長電泳時間，在條帶分離清晰后進行切膠回收，以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA回收收率，切膠時應盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小或DNA初始量少，回
收率將會偏低。
● 溶液Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直
接用于各種酶促反應等，不會影響后續試驗。
● 為了保證回收效率，請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。
● 請嚴格按照操作步驟操作。
操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
1 切取含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA部分的凝膠，減少凝膠體積，提高DNA回收率。
● 切膠時，請使用長波長UV（360 nm）光盒。且不要將DNA長時間暴 露在紫外燈下，以防DNA損傷。
2 稱取凝膠的重量，近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱量方法：取1.5 ml或2 ml離心管，用電子天平稱其初質量，切膠裝在離心管后稱終質
量，兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量有差異，因此，每個離心管的重量需單獨稱量。
3 按照每100 mg瓊脂糖凝膠對應100 μl溶液BD的比例，向離心管中加入溶液BD。
4 55℃-65℃水浴7-10min，直至凝膠完全融化。期間需要顛倒混合3次。
● 瓊脂糖必須完全融化，以免堵塞柱子，嚴重影響DNA片段的回收效率。
● 如果總體積大于500 μl，可適當增加溶膠時間。
● 若此時溶液變紅，可加10 μl 3M NaAc（pH 5.2）。
如要從反應液中回收DNA，則向反應液中加入等體積的BD，充分混勻，后續步驟相同：
5 將步驟4所獲溶液置于DNA純化柱中，靜置2min。
● 膠塊完全溶解后最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱，因為純化柱在較高溫度時結合DNA的能力 較弱。
● 如果所獲溶液過多，超過DNA純化柱容積（700 μl），可分次加入DNA純化柱中。
6 12,000 rpm離心1min。若溶液體積大于DNA純化柱的容積，可分兩次離心，棄濾液。
● 此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min，棄濾液。
● 溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋，即含80%乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫，以獲得高質量的DNA片段。
8 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm, 離心1min，棄濾液。
9 12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續酶促反應。同時也利于DNA片段的充分溶解。
10 將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處，懸空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃預熱），靜置2min。12,000 rpm 離心1min，管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替，但其pH需為8.0-8.5，加入體積視DNA目的片段的多少、 用戶對目的片段濃度要求而定。
● 對溶液Eluent 65℃預熱，會提高提取DNA目的片段的產量。
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